熒光分光光度法在克拉維酸聚合物及其他熒光雜質(zhì)含量測(cè)定上的應(yīng)用
天津港東科技股份有限公司? 應(yīng)用分析部
摘要：阿莫西林克拉維酸鉀為阿莫西林與克拉維酸的復(fù)方制劑，前者是廣譜青霉素但不耐青霉素酶，后者為β-內(nèi)酰胺酶抑制劑，具有廣譜抑酶作用，合用可提高阿莫西林抗產(chǎn)酶耐藥菌的作用，因此研究阿莫西林克拉維酸鉀片中克拉維酸聚合物及其他熒光雜質(zhì)含量具有實(shí)際意義。本文以測(cè)定阿莫西林克拉維酸鉀片（2:1）中克拉維酸鉀及其他熒光雜質(zhì)含量為例，依據(jù)《阿莫西林克拉維酸鉀片（2:1）一致性評(píng)價(jià)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》，應(yīng)用港東F-280型熒光分光光度計(jì)對(duì)拉維酸鉀及其他熒光雜質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果證明此方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確。
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關(guān)鍵詞：阿莫西林克拉維酸鉀片（2:1）；克拉維酸鉀及其他熒光雜質(zhì)；分子熒光
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·?原理
樣品經(jīng)溶解后調(diào)節(jié)pH至5.0，其中克拉維酸聚合物和其他熒光雜質(zhì)已經(jīng)形成了穩(wěn)定的聚合物，過(guò)濾后，用分子熒光分光光度計(jì)檢測(cè)其在激發(fā)波長(zhǎng)365nm、發(fā)射波長(zhǎng)440nm處的熒光強(qiáng)度，以此計(jì)算克拉維酸聚合物及其他熒光雜質(zhì)在阿莫西林克拉維酸鉀片中所占比例。
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·?實(shí)驗(yàn)條件
1、儀器及附件：
?? 天津港東 F-280型熒光分光光度計(jì)????? ?1臺(tái)
?? 熒光石英比色皿??? ???????????????????2個(gè)
?? 超聲波清洗機(jī)? ???????????????????????1臺(tái)
2、分析條件：
激發(fā)波長(zhǎng)：365nm
發(fā)射波長(zhǎng)：440nm
3、藥品試劑：
??? 氫氧化鈉（分析純）、磷酸二氫鈉（分析純）、硫酸奎寧（分析純）、硫酸（分析純）、蒸餾水。
4、溶液配制：
（1）氫氧化鈉溶液（1mol/L）
精密稱(chēng)取4.0000g氫氧化鈉粉末置于100ml小燒杯中，取少量的蒸餾水將其溶解，轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶?jī)?nèi)，用蒸餾水定容。
（2）磷酸二氫鈉溶液（0.1mol/L）
精密稱(chēng)取3.9000g磷酸二氫鈉粉末（NaH2PO4·2H2O分子量156）置于100ml小燒杯中，取少量的蒸餾水將其溶解，轉(zhuǎn)移至250ml容量瓶?jī)?nèi)，用蒸餾水定容。
（3）硫酸溶液（0.5mol/L）
用移液管量取13.5ml濃硫酸置于放有少量蒸餾水的100ml小燒杯中，待其放熱結(jié)束，轉(zhuǎn)移至500ml容量瓶?jī)?nèi)，用蒸餾水定容。
（4）硫酸奎寧對(duì)照品溶液（0.42μg/ml）
① 硫酸奎寧溶液（5000μg/ml）
精密稱(chēng)取0.2500g硫酸奎寧粉末置于100ml小燒杯中，取少量的0.5mol/L硫酸溶液將其溶解，轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶?jī)?nèi)，用0.5mol/L硫酸溶液定容。
② 硫酸奎寧溶液（50μg/ml）
用移液管量取1ml 5000μg/ml硫酸奎寧溶液，置于100ml容量瓶中，用0.5mol/L硫酸溶液定容。
③ 硫酸奎寧對(duì)照品溶液（0.42μg/ml）
用移液管量取0.84ml 50μg /ml硫酸奎寧溶液，置于100ml容量瓶中，用0.5mol/L硫酸溶液定容。
（5）供試品溶液（1mg/ml）
取本品若干顆，置于瑪瑙研缽中研磨成細(xì)粉，過(guò)100目篩子，混勻，取篩出的細(xì)粉適量，精密稱(chēng)取0.1500g（本品中阿莫西林與克拉維酸鉀的質(zhì)量比為2:1，所稱(chēng)取細(xì)粉應(yīng)約含克拉維酸鉀25mg），置于100ml小燒杯中，取少量的0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液將其溶解，轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，用0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液定容，用漏斗進(jìn)行過(guò)濾，取其濾液。
5、其它：
分析天平（0.0001g）、瑪瑙研缽、100目篩子、稱(chēng)量紙若干、pH試紙（pH1～14）、50ml容量瓶、250ml容量瓶、500ml容量瓶、100ml容量瓶、1ml移液管、5ml移液管、10ml移液管、10ml具塞刻度試管、比色管架、漏斗、100ml小燒杯、玻璃棒若干、擦鏡紙等。
三、實(shí)驗(yàn)方法
1、供試品樣品制備
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2、對(duì)照品樣品制備 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??
3、空白溶液制備
供試品空白溶液：0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液（pH=5.0）。
對(duì)照品空白溶液：0.5mol/L硫酸溶液。
· 測(cè)定結(jié)果
應(yīng)用港東F-280型熒光分光光度計(jì)的“波長(zhǎng)掃描”模塊，分別讀取待測(cè)溶液的熒光強(qiáng)度，根據(jù)計(jì)算公式得到化妝品樣品中總硒的含量。
儀器設(shè)置參數(shù)：
激發(fā)波長(zhǎng) | 365nm | 發(fā)射起始波長(zhǎng) | 200nm | 激發(fā)狹縫 | 10.0nm |
PMT電壓 | 400V | 發(fā)射終止波長(zhǎng) | 760nm | 發(fā)射狹縫 | 10.0nm |
掃描速度 | 1200nm/min | 靈敏度 | 0.1s | 增益 | 1 |
以下為港東F-280型熒光分光光度計(jì)測(cè)定阿莫西林克拉維酸鉀片（2:1）中克拉維酸聚合物及雜質(zhì)的發(fā)射譜圖和計(jì)算樣品中克拉維酸聚合物及雜質(zhì)含量的計(jì)算公式。
?波長(zhǎng)掃描測(cè)試譜圖：
注：紅色譜圖為供試品參比溶液；黑色譜圖為對(duì)照品參比溶液；藍(lán)色譜圖為對(duì)照品溶液；綠色譜圖為供試品溶液。
?計(jì)算公式：
式中：Fx為供試品溶液熒光強(qiáng)度；
????? Fs為硫酸奎寧對(duì)照品溶液熒光強(qiáng)度；
????? Cx為供試品溶液中克拉維酸的濃度，mg/mL；
????? Cs為對(duì)照品溶液中硫酸奎寧的濃度，μg/mL；
????? 0.42為對(duì)照品溶液中硫酸奎寧的理論濃度，μg/mL。
本實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)樣品中克拉維酸聚合物及其他熒光雜質(zhì)含量為5%，樣品1中克拉維酸聚合物及其他熒光雜質(zhì)含量為0.606%，樣品2中克拉維酸聚合物及其他熒光雜質(zhì)含量為0.567%，未超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)樣品中的鋁鹽含量，故檢測(cè)合格。
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·?結(jié)論
根據(jù)《阿莫新林克拉維酸鉀片（2:1）一致性評(píng)價(jià)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》所述方法，進(jìn)行樣品測(cè)試，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液的熒光強(qiáng)度（Fx）小于對(duì)照品溶液的熒光強(qiáng)度（Fs）（5%w/w,以克拉維酸含量計(jì)算），故符合阿莫新林克拉維酸鉀片（2:1）一致性評(píng)價(jià)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
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