熒光分光光度法在多維片中維生素B2含量測定上的應(yīng)用
天津港東科技股份有限公司-應(yīng)用分析部
摘要：?維生素B2又名核黃素，在食品中以游離形式或磷酸酯等結(jié)合形式存在。膳食中的主要來源是各種動物性食品，其次是植物性食品的豆類和新鮮綠葉蔬菜。檢測其含量也有著許多的方法，其中熒光分光光度法是對熒光物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的有效方法，它是維生素B2含量測定的一個比較常用的方法。
本文以測定多維片中維生素B2（核黃素）元素含量為例，依據(jù)GB/T 5009.85-2003《食品中核黃素（維生素B2）的測定》，應(yīng)用港東F-380型熒光分光光度計(jì)對多維片中維生素B2含量進(jìn)行測定。結(jié)果證明此方法操作簡便，線性良好是測定多維片中維生素B2含量的理想方法。
關(guān)鍵詞：熒光分光光度法 ?維生素B2核黃素 ?多維片
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· 原理
核黃素在 440nm～500nm 波長光照射下發(fā)生黃綠色熒光。在稀溶液中其熒光強(qiáng)度與核黃素的濃度成正比。在波長 525nm 下測定其熒光強(qiáng)度。試液再加入低亞硫酸鈉（Na 2 S 2 O 4 ），將核黃素還原為無熒光的物質(zhì)，然后再測定試液中殘余熒光雜質(zhì)的熒光強(qiáng)度，兩者之差即為多維片中核黃素所產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度。
? ?
·?實(shí)驗(yàn)條件
1、儀器及附件：
天津港東 F-380 型熒光分光光度計(jì)
熒光石英比色皿
?
2、分析條件：?
? ? 激發(fā)波長：440nm
? ??發(fā)射波長：525nm
?
3、藥品：
? ??硅鎂吸附劑（60～100 目）、乙酸鈉、木瓜蛋白酶、淀粉酶、鹽酸、氫氧化鈉、低亞
? ??硫酸鈉（Na 2 S 2 O 4 ）、洗脫液（丙酮、冰乙酸、水）、高錳酸鉀、過氧化氫、核黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液（純度 98%）等。
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4、其他：
電熱恒溫培養(yǎng)箱、高壓消毒鍋、分析天平（0.0001g）、容量瓶、鹽基交換柱、三角瓶、瓷坩堝、移液管、刻度試管、具塞比色管、試管架、擦鏡紙、滴管、量筒、磁力攪拌器、pH 計(jì)等。
?
·?樣品及標(biāo)準(zhǔn)樣品處理
? ? 特別注意：整個操作過程需避光進(jìn)行
1、樣品溶液的制備
（1）樣品提取
? ? ① 水解
? ???② 酶解
? ??③ 過濾
（2）氧化去雜質(zhì)
（3）核黃素的吸附和洗脫
2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
（1）核黃素標(biāo)準(zhǔn)儲備液（25μg/mL）：
? ? 將標(biāo)準(zhǔn)品核黃素粉狀結(jié)晶置于真空干燥器或盛有硫酸的干燥器中。經(jīng)過 24 小時后，
? ??準(zhǔn)確稱取精確稱取 50mg，置于 2L 容量瓶中，加入 2.4mL 冰乙酸和 1.5L 水。將容量瓶置
? ??于溫水中搖動，待其溶解，冷至室溫，稀釋至 2L，移至棕色瓶內(nèi)，加少許甲苯蓋于溶液表面，于冰箱中避光保存。
?
（2）核黃素標(biāo)準(zhǔn)使用液（1μg/mL）
吸取 2.00mL 核黃素標(biāo)準(zhǔn)儲備液（25μg/mL），置于 50mL 棕色容量瓶中，用水稀釋至
刻度。避光，貯存于 4℃冰箱，可保存一周。
3、空白溶液
待測試樣及標(biāo)準(zhǔn)的熒光值測量后，在各管的剩余液（約 5～7mL）中加入 0.1mL20%的低亞硫酸鈉溶液（Na 2 S 2 O 4 ），立即混勻，在 20s 內(nèi)測出各管的熒光值，作為各自的空白值。
·?測定結(jié)果
應(yīng)用港東 F-380 型熒光分光光度計(jì)的“波長掃描”模塊，分別讀取待測溶液熒光強(qiáng)度，根據(jù)計(jì)算公式得到樣品維生素B 2 的含量。
·?測定結(jié)果
應(yīng)用港東 F-380 型熒光分光光度計(jì)的“光度測定”模塊，分別讀取待測溶液的熒光強(qiáng)度，根據(jù)計(jì)算公式得到樣品維生素B2的含量。
?
·?結(jié)論
采用熒光分光光度法測定多維片中維生素B2含量，操作簡單，方法準(zhǔn)確，是一種理想的方法。
由于維生素B2待測液遇光不穩(wěn)定，因此實(shí)驗(yàn)對儀器的功能要求高。港東 F-380 型熒光分光光度計(jì)率先在硬件上采用了激發(fā)側(cè)擋光快門的設(shè)置，從而避免了樣品被強(qiáng)光的直接照射，使整個實(shí)驗(yàn)操作簡便，結(jié)果重現(xiàn)性良好。