熒光分光光度法在黃曲霉毒素含量測(cè)定上的應(yīng)用

天津港東科技股份有限公司應(yīng)用分析部

摘要：?熒光分光光度法是對(duì)熒光物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的有效方法。目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于測(cè)定食品中黃曲霉毒素含量的方法以免疫親和層析法為主，其中熒光分光光度法是一個(gè)比較常用的方法。

本文依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)G B/T 18979-2003《食品中黃曲霉毒素的測(cè)定 免疫親和層析凈化高效液相色譜法和熒光光度法》和G B 5413.37-2010《乳和乳制品中黃曲霉毒素M 1的測(cè)定》中的親和免疫層析凈化熒光光度法，應(yīng)用港東F-380型熒光分光光度計(jì)對(duì)食品中黃曲霉毒素含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果證明此方法操作簡(jiǎn)便，線性良好是測(cè)定食品中黃曲霉毒素含量的理想方法。

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關(guān)鍵詞： ?熒光分光光度法 ?黃曲霉毒素 ?免疫親和層析 ?食品 ?乳品

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· 原理

試樣經(jīng)過(guò)甲醇-水提取，提取液經(jīng)過(guò)濾、稀釋后，濾液經(jīng)過(guò)含有黃曲霉毒素特異的免疫親和層析凈化，此抗體對(duì)黃曲霉毒素B 1 、B 2 、G 1 、G 2 、M 1 具有專一性，黃曲霉毒素交聯(lián)在層析介質(zhì)中的抗體上。用水將免疫親和柱上雜質(zhì)除去，以甲醇通過(guò)免疫親和層析柱洗脫，加入溴溶液衍生，以提高測(cè)定靈敏度 。 洗脫液通過(guò)熒光光度計(jì)測(cè)定黃曲霉毒素（B1+B2 +G1 +G2）總量及黃曲霉毒素M1的量。

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·?實(shí)驗(yàn)條件

儀器及附件：

天津港東 F-380 型熒光分光光度計(jì)

熒光石英比色皿

分析條件：

激發(fā)波長(zhǎng)：360nm

發(fā)射波長(zhǎng)：450nm

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藥品：?

樣品前處理試劑：甲醇（色譜純）、氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鉀；

樣品衍生溶液：溴溶液儲(chǔ)備液（0.01%）、溴溶液工作液（0.002%）；

標(biāo)準(zhǔn)校正溶液：二水硫酸奎寧、硫酸；

黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)品：B 1 、B 2 、G 1 、G 2 、M 1。

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其它：?

分析天平（0.0001g）、三角瓶、容量瓶、高速均質(zhì)器（18000r/min～22000r/min）、定量濾紙、移液管、玻璃注射器、黃曲霉毒素免疫親和柱（B 1 、B 2 、G 1 、G 2 總量柱和M 1柱）、空氣壓力泵、離心機(jī)（轉(zhuǎn)速≥7000轉(zhuǎn)/分鐘）、玻璃試管等。

·?樣品及標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備

樣品的提取：

（1）樣品提取流程圖

（2）樣品提取流程圖對(duì)應(yīng)各實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)加入溶液的量

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免疫親和層析凈化：

（1）免疫親和層析凈化流程圖

（2）免疫親和層析凈化流程圖對(duì)應(yīng)各實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)加入溶液的量

標(biāo)準(zhǔn)樣品待測(cè)液制備：

（1）國(guó)標(biāo)方法

在激發(fā)波長(zhǎng)360nm，發(fā)射波長(zhǎng)450nm條件下，以0.05mol/L硫酸溶液為空白，調(diào)節(jié)熒光光度計(jì)的讀數(shù)值為0.0μg/L；以熒光光度計(jì)溶液校準(zhǔn)溶液（硫酸奎寧溶液）調(diào)節(jié)熒光光度計(jì)的讀數(shù)值為20.0μg/L（乳和乳粉中讀數(shù)值為2.0μg/L）。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線法

用苯-乙腈（98+2）溶液配制黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液0.100mg/mL（100μg/mL），分別準(zhǔn)確吸取黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL分別置于10mL容量瓶中，用苯-乙腈（98+2）定容,配制成濃度為5.0、10.0、15.0、20.0μg/mL的黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液。

·?測(cè)定結(jié)果

應(yīng)用F-380型熒光分光光度計(jì)的“光度測(cè)定”模塊建立黃曲霉毒素的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，并進(jìn)行樣品測(cè)定。

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·?結(jié)論

采用熒光分光光度法測(cè)定食品中黃曲霉毒素含量，操作簡(jiǎn)單，方法準(zhǔn)確，是一種理想的方法。

應(yīng)用免疫親和層析凈化熒光分光光度法，建立黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)工作曲線所測(cè)試的數(shù)據(jù)比免疫親和層析凈化熒光光度法，硫酸及硫酸奎寧溶液校正黃曲霉毒素含量所得到的數(shù)據(jù)更加準(zhǔn)確。

· 參考資料

?1、 ?GB/T 18979-2003《食品中黃曲霉毒素的測(cè)定 免疫親和層析凈化高效液相色譜法和熒光光度法》；

?2、 GB 5413.37-2010《乳和乳制品中黃曲霉毒素M1的測(cè)定》。