摘要： 熒光分光光度法是對(duì)熒光物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的有效方法。目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于測(cè)定海洋生物體重石油烴含量的方法有著明確的規(guī)定，即GB 17378.6-2007《海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范? 第六部分：生物體分析》——13.石油烴? 熒光分光光度法。此方法屬于仲裁方法。
本文依據(jù)國(guó)家GB 17378.6-2007內(nèi)容，應(yīng)用港東F-380型熒光分光光度計(jì)對(duì)海洋生物體中石油烴含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果證明此方法操作簡(jiǎn)便， 線性良好是測(cè)定海洋生物體中石油烴含量的理想方法。
關(guān)鍵詞： 熒光分光光度法 海洋生物體 石油烴
原理
生物樣品經(jīng)氫氧化鈉皂化， 用二氯甲烷萃取。將萃取液 中的二氯甲烷蒸發(fā)后， 殘留物用石油醚溶解， 于激發(fā)波長(zhǎng) 310nm，發(fā)射波長(zhǎng)360nm處進(jìn)行熒光分光光度測(cè)定。
實(shí)驗(yàn)條件
1、儀器及附件：
天津港東 F-380 型熒光分光光度計(jì)
熒光石英比色皿
2、分析條件：
激發(fā)波長(zhǎng)：310nm
發(fā)射波長(zhǎng)：360nm
3、藥品：
20#標(biāo)準(zhǔn)油（國(guó)家環(huán)境保護(hù)總局） 、活性炭（60目）、石 油醚（沸點(diǎn)范圍： 60～90℃） 、無(wú)水乙醇（重蒸餾）、氯化 鈉（飽和溶液） 、氫氧化鈉（優(yōu)級(jí)純）、鹽酸、二氯甲烷 （重蒸餾）等。
4、其它：
分析天平（0.0001g） 、容量瓶、三角瓶、移液管、燒 杯、具塞比色管、擦鏡紙、玻璃層析柱、皂化瓶、錐形分液
漏斗、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器等。
?標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品測(cè)定
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線制備流程圖
（2）具體步驟
① 移? ? ?。悍謩e量取0mL、0.10mL、0.30mL、0.50mL、0.70mL、0.90mL油標(biāo)準(zhǔn)使用液（100μg/mL）于100mL皂化瓶 中；
② 皂? ? 化：向上述皂化瓶中加入20mL氫氧化鈉溶液（6mol/L），室溫下避光皂化8～12小時(shí)，然后加入20 mL無(wú)水乙醇溶液（重蒸餾），充分搖勻；
③ 分? ? 液：4小時(shí)后將皂化液轉(zhuǎn)入500mL分液漏斗中，用10mL二氯甲烷（重蒸餾）洗滌皂化瓶，洗滌液轉(zhuǎn)入分液漏斗中，加30mL氯化鈉溶液和100mL水，振蕩3min后靜置分層；
④ 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)：將有機(jī)相收集與旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，用10mL二氯甲烷溶液再萃取一次，合并有機(jī)相，于50℃水浴中將二氯甲 烷蒸發(fā)至0.5mL；
⑤ 收集待測(cè)：取下蒸發(fā)瓶用氮?dú)鈱埩舻挠袡C(jī)溶劑吹干，準(zhǔn)確加入10.0mL脫芳石油醚溶解殘留物。
2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
設(shè)置激發(fā)波長(zhǎng)310nm， 發(fā)射波長(zhǎng)360nm， 分別測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)液的熒光強(qiáng)度， 以相對(duì)熒光強(qiáng)度Ii-空白熒光強(qiáng)度I0為縱坐 標(biāo)，石油烴含量（μg/mL）為橫坐標(biāo)建立工作曲線。
3、樣品的制備及測(cè)定
（1）樣品制備流程圖
① 樣品前處理：烘干或冷凍干燥（對(duì)類(lèi)脂物含量高的生物樣品）；
② 以相同的步驟同時(shí)制備分析空白樣品。
測(cè)定結(jié)果
應(yīng)用F-380型熒光分光光度計(jì)的“光度測(cè)定”模塊建立石油烴的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，并進(jìn)行樣品測(cè)定。
結(jié)論
采用熒光分光光度法測(cè)定海洋生物體中石油烴的含量，操作簡(jiǎn)單，方法準(zhǔn)確，是一種理想的方法。
由于石油烴標(biāo)準(zhǔn)溶液在測(cè)試過(guò)程中需要進(jìn)行樣品的背景扣除， 因此實(shí)驗(yàn)對(duì)儀器的功能要求更高。港東F-380型熒光分光光 度計(jì)率先在軟件上采用了獨(dú)特的雙背景扣除功能，自動(dòng)計(jì)算石油烴的濃度，使整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)便，結(jié)果重現(xiàn)性良好。
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Printed in CHINA, September 1, 2011
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