摘要： 硒元素廣泛的存在于海洋生物體、水質(zhì)、食品以及飼料中，檢測其含量也有著許多的方法。其中熒光分光光度法是對熒光物質(zhì)進行定性和定量的有效方法，它是硒元素含量測定的一個比較常用的方法。
本文以測定海洋生物體中硒元素含量為例，依據(jù)GB 17378.6-2007《海洋監(jiān)測規(guī)范：第6部分生物體分析》12.1 硒 熒光分光光度法（仲裁法），應(yīng)用港東F-380型熒光分光光度計對硒元素含量進行測定。結(jié)果證明此方法操作簡便， 線性良好是測定硒元素含量的理想方法。
關(guān)鍵詞： 熒光分光光度法 硒 海洋生物體 水 食品 飼料
?原理
生物樣品經(jīng)硫酸—高氯酸—鉬酸鈉消解，在酸性介質(zhì) 中，四價硒與2,3-二氨基萘（DAN）反應(yīng)生成有綠色熒光的 4,5-苯并苤硒腦，用環(huán)己烷萃取，在激發(fā)波長376nm， 發(fā)射波長520nm下，進行熒分光光度測定。
?實驗條件
儀器及附件：
天津港東 F-380 型熒光分光光度計
熒光石英比色皿
分析條件：
激發(fā)波長：376nm
發(fā)射波長：520nm
藥品：
硝酸（優(yōu)級純）、高氯酸（優(yōu)級純）、鹽酸（優(yōu)級純）、氨水 （優(yōu)級純）、甲基紅溶液、乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-2Na）、鹽酸羥胺、2， 3-二氨基萘、硒標準溶液等。
其它：
精密pH試紙、電熱板、分析天平（0.0001g） 、粉碎機、烘箱、水浴鍋、具塞比色管、分液漏斗、擦鏡紙、容量瓶、三角瓶、移液管等。
?樣品及標準樣品處理
1、樣品前處理
將樣品進行烘干， 并用瑪瑙研缽磨碎， 全部過80目～100目（180μm ～ 154μm）尼龍篩。
2、樣品消化
（1）樣品制備液流程圖
（2）樣品空白制備液
按照上面樣品制備流程圖的步驟制備樣品空白制備液，即不加入待測樣品，直接進入“加水潤濕”步驟。
（3）樣品及樣品空白待測液
3、標準曲線待測液
取6個250mL錐形瓶， 分別加入0.00mL,1.00mL,2.00mL,3.00mL,4.00mL,5.00mL硒標準使用液（0.1μg/mL） ，加水約10mL， 混勻。按照樣品消化流程對標準品進行消化處理，然后進行待測液的制備，配制成硒標準曲線溶液待測液。
? 測定結(jié)果
應(yīng)用港東F-380型熒光分光光度計的“光度測定”模塊建立硒標準工作曲線，并進行樣品測定。
? 結(jié)論
采用熒光分光光度法測定硒元素含量，操作簡單，方法準確，是一種理想的方法。
由于硒元素待測液遇光不穩(wěn)定， 而且在測定過程中需要進行樣品的背景扣除， 因此實驗對儀器的功能要求更高。港東 F-380型熒光分光光度計率先在硬件上采用了激發(fā)側(cè)擋光快門的設(shè)置， 從而避免了樣品被強光的直接照射； 軟件上采用了獨特 的雙背景扣除功能，自動計算硒元素的濃度，使整個實驗操作簡便，結(jié)果重現(xiàn)性良好。
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Printed in CHINA, September 1, 2011
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